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3条ELISA试验的原理
[2011/6/4]
ELISA(酶联免疫吸附测定)作为一种高度敏感和特异的免疫分析技术,其运作基于三项核心原理,这些原理共同确保了检测的准确性和效率:
固相吸附特性:ELISA技术的第一步涉及到将目标抗原或抗体物理吸附至固相载体表面,通常是聚苯乙烯微孔板。这种吸附并非随意,而是基于抗原或抗体分子与固相表面间的非共价相互作用,尤其是疏水性相互作用,这一过程保留了分子的免疫活性,使其能特异性识别并结合其对应抗体或抗原。
酶标记的保持活性:接着,抗体或抗原会被共价连接到酶分子上,形成所谓的酶标记物。这个过程对保持酶的催化活性和抗体/抗原的免疫识别能力至关重要。酶标记物能在保持免疫学特性的基础上,通过其催化活性对底物进行转化,从而生成可检测的信号,如颜色变化。
信号量化与分析:当酶标记的抗体或抗原与样品中的对应抗原或抗体结合后,形成的复合物会在加入特定底物后产生颜色反应。此颜色的深浅与样品中目标分子的浓度直接相关,即浓度越高,颜色越深。通过比色测定,可以定量分析出样品中目标抗原或抗体的精确含量,从而实现对特定分析物的定性及定量检测。
ELISA技术凭借其独特的优势,如高灵敏度、特异性强、操作简便快捷、结果稳定及易于自动化等特点,已被广泛应用于多个领域的研究与诊断中。它不仅能够用于多种传染病、寄生虫病以及非传染性疾病标志物的免疫诊断,还能实现大分子和小分子抗原的精确定量,适用于临床样本检测及大规模血清流行病学调查。此外,ELISA的应用范围还在不断拓展,涵盖了细胞内成分的免疫酶定位、抗酶抗体的研究、微量免疫复合物的可视化,以及体液中抗原或抗体的精确定量分析,彰显了其在生物医学研究和疾病早期诊断中的重要价值。