生化实验室常用仪器操作一览

　　【冷冻真空干燥机】

　　基本原理

　　高真空状态下，利用升华原理使预先冻结的物料中的水份直接从冰态升华为水蒸汽而被除去，从而使物料干燥。真空冷冻干燥广泛应用于多种产品，可确保物品中蛋白质、维生素等各种营养成份，特别是那些易挥发热敏性成份不损失，因而能最大限度地保持原有的营养成份。还能有效防止干燥过程中的氧化，可以避免营养成份的转化和状态变化。冻干制品呈海绵状、无干缩、复水性好、含水份极少，相应包装后可在常温下长时间保存和运输。

　　操作步骤

　　1、系统准备

　　检查系统是否清洁和干燥，真空泵与冷冻机是否连接，接通电源，检查排气口、冷冻管的密封性。

　　2、加样

　　样品需要预冷到至少-40℃，可以在深低温冰箱(-70℃)或者液氮(-196℃)中进行。打开密封管开关，搬开冷冻舱，将样品置于冷冻舱里的隔板上。关闭密封管开关。

　　3、冷冻

　　打开冷冻开关，等待20～30分钟，直到冷冻舱的温度低于-40℃。

　　4、抽真空

　　打开真空泵开关，等待10～15分钟，直到系统压力低于100 millitorr。

　　5、监控过程

　　确保系统参数(冷冻温度、真空压力)在正常范围内;

　　定期检查冷冻舱中的结冰情况，决定是否要除霜;

　　观察样品是否干燥完全，一般干燥过程需要24～72小时，视具体样品通过目测而定。

　　6、关闭系统

　　关闭总开关，接上排气管或打开密封管开关以解除真空状态。

　　关闭真空开关，关闭冷冻开关，取出样品。

　　7、系统维护

　　除霜：冷冻舱下面的压缩舱内如果有霜，则接上排水管，然后用少量热水(不能超过压缩舱容积的一半)促进冰霜的融化。不能通过敲击冰块来除霜。

　　除湿：压缩舱、冷冻舱、真空泵压缩机以及垫圈等表面的水雾均需擦干。

　　清洁：压缩舱、冷冻舱可以用温和的去污剂或苏打水来清洗，然后干燥并撤去排水管，并重新密封排水孔。

　　泵油：定期检查油位，排除油雾。

　　注意事项

　　1、样品要保持冷冻，不能“回融”。

　　大多数溶剂的冰点高于-40℃，所以冷冻舱温度低于-40℃可以使一般样品保持冰态。

　　为确保样品不“回融”，可将冰冻的样品制成小于20 mm的小块。

　　2、有毒或有腐蚀性的样品。

　　最好不要用来冷冻干燥，如果一定要用，则更加需要系统维护，并需要另外定购特定的滤器以保护真空泵。

　　3、真空泵油需保持干净。

　　微黄或无色的油是干净的，颜色变深表示有酸污染，雾状浑浊表示有水污染。有污染时需要更换好油。

　　【自动双重蒸馏水器】

　　操作说明

　　1.拧开自来水龙头，让水流开始较为细小，观察第一管水位超过石英加热管;

　　2. 接通电源，按下第一管的ON开关，这时水速仍以细小为主，等待第一管内自来水沸腾，这时候将水流逐渐调大至适中程度;

　　3. 等待第二管内自来水超过石英加热管，按下第二管的ON开关，第二管随即加热，注意观察两个管子的水位变化，及时做出调整。

　　4.一般来说有下面三种情况：

　　a→第一管水位过高，接近水蒸气散出口，这时宜将调整水位的橡胶管放置低于玻璃管位置，待自来水流出至适当位置，将橡胶管回复原位;

　　b→第一管水位过低，调整自来水龙头加大进水，或者调节橡胶管上控制开关加大进水，乃至关闭电源待进水到适当位置，重新打开电源，继续蒸馏。

　　C→第二管水位过低，按下第二管的OFF开关，待水位升高超过石英加热管时再开始蒸馏。

　　5. 双蒸结束，先关闭控制面板上OFF两个电源，然后关自来水龙头。

　　【高压锅】

　　操作程序

　　1.打开锅盖，倒入蒸馏水，滿至WATER　LEVEL，以后每次使用时，必须补足水滿到WATER　LEVEL。

　　2.把插头插上电源，按电源开关ON，显示器指示灯亮起，机器开始进行程序自检。

　　3.按显示屏的提示输入工作密码。

　　4.放置待灭菌的物品入灭菌室，并旋紧锅盖。

　　5.根据所高压物品的不同，按过程选择键1-6中的某一数字选择不同的灭菌流程。一般固体灭菌选择按键4，液体灭菌选择按键5。特殊要求的，可以先按下MODE键，输入工作密码。选择要重新设置的项目进行修改。

　　6.按启动键START键，即开始此灭菌模式。

　　NOTE：须待机器进入正常运行程序后，人方可离开。

　　7.当灭菌流程结束时，响铃鸣叫30秒。

　　8.确认压力显示器的压力降为0以后，把锅门把手旋松，让残余蒸气释出，待5-10分钟后推开跨桿，准备取出灭菌物品。如需高压另一锅，则需重新加水滿到WATER　LEVEL，同时处理废水收集瓶中的废水。

　　9.在高压锅使用记录上进行登记。

　　【离心机】

　　操作步骤：

　　1、将离心机打开，仪器此时的工作状态为最后操作设置的参数。

　　2、平衡离心管，两两对称放入离心机。

　　3、盖好离心盖，盖子锁上时才能离心。

　　4、选择操作模式：

　　设置参数：1)离心速度：300rpm~14000rpm;2)离心时间：1min~99min;

　　3)离心温度：-10℃～40℃;4)最低加速度：1～5个，1最慢

　　5)最低减速度：0～4 coast-down,(0是惯性)

　　(1)手工模式：不重新设置时，按上次设置的参数离心，可以重新设置参数离心。

　　(2)程序模式：可预先设置5个程序储存，不同的程序按不同的序号，相应的指示灯亮，再按另外的序号可以选另外的程序。

　　(3)瞬时(MOM)操作模式：持续按MOM键，可使离心达到最大速度和最大加速度，当放开时离心减慢直到停止，离心时显示的时间是已经用了的时间(以秒计数)。

　　5、按START键，开始离心，绿灯亮。此时显示实际的离心速度和温度，时间为剩余时间。

　　6、当设置时间到，离心机通过制动装置自动停止离心，黄灯亮，可以打开离心盖。

　　如何设置相应参数?

　　1、用”key-programe”取消错选的程序。

　　2、用“SOFT ACL”键设置加速度：高加速灯灭，低加速灯亮;按住键3秒，灯闪烁，用设置离心速度的键选择1～5

　　3、用“SOFT DCL”键设置加速度：高减速灯灭，低减速灯亮;按住键3秒，灯闪烁，用设置离心速度的键选择0～4

　　4、设置离心温度、速度和时间：当“SET”灯闪烁时，可以改变参数，用箭头键选择。设置后3秒，灯停止闪烁，自动确认。

　　如何记忆一个程序?

　　1、在设置的参数闪烁时，按程序键1～5，当程序键旁的灯亮时，参数被储存。

　　2、保护程序不被修改：可以在参数闪烁时，按一个程序键的同时按下“LOCK PROG(STOP)”键。取消保护时再次按程序键同时按下“LOCK PROG(STOP)”键。

　　警告信息：

　　1、END：在每次离心循环结束时显示，在进行下一次操作时显示设置得参数。

　　2、LID:当离心开始而盖子没盖紧时显示，并报警。

　　3、IMBAL:当离心物品不平衡时显示，并报警。

　　4、MAIMS:当动力系统出错时显示。

　　5、OVERT：当离心室里的温度>45℃时显示。

　　6、SET:当设置速度大于最大离心速度时显示。

　　注意事项：

　　1、离心时不要移动或转动仪器。

　　2、不要使用说明书不允许使用的转子和附属物。

　　3、不能超过最大转速。

　　4、不使用不适合离心的管子或瓶子。

　　5、不在仪器周围放置危险品。

　　6、不使用易燃易爆物。

　　【杂交炉】

　　操作步骤

　　1、设置温度

　　按一下up或down键，显示屏将由亮到暗开始闪烁，此时显示的是上次设置的温度。如需改变，则通过up或down键来上调或下调。停按5秒钟后，数字停止闪烁，并开始显示炉内温度。(第一次使用前需要至少24小时来稳定加热器。)

　　2、校准

　　需要校准显示温度与实际温度是否一致。将一枝标准温度计置于样品附近，稳定1小时后，比较2者的数值是否一致。

　　如需校准，则同时按住up和down键直到显示屏上数字中前后2个小数点开始闪动，然后用up或down键来改变数值，使其与温度计的参考数值一致。再次稳定加热器。

　　3、转速调节

　　转动开关有3个位置，上位表示开，其转速可在0～15 RPM之间调节;中位表示关;下位表示短时间转动，按住才转动松开即关。

　　维护

　　使用前后观察系统是否清洁，如果不是，则需要清洗。

　　1、颅腔

　　用肥皂和水进行清洗，然后干燥。如有污染，则用适当的消毒剂清洗，注意不要用含氯漂白剂，否则容易造成损坏。

　　2、接水盘和旋转架

　　先取下来，然后用同样的溶液进行清洗。

　　【干胶仪】

　　操作步骤

　　1.将干胶仪的排水管连接到真空泵上，阀门旋到开的位置。

　　2.打开电源开关。

　　3.选择干胶CYCLE：

　　a.按CYCLE健两次;

　　b.当灯在闪动状态时，按RAISE或LOWER健选择干胶CYCLE。

　　4. 选择循环温度：

　　a.按TEMP键两次;

　　b. 当灯在闪动状态时，按RAISE或LOWER健选择温度。

　　5.选择循环时间：

　　a.按TIME键两次;

　　b. 当灯在闪动状态时，按RAISE或LOWER健选择时间。

　　6.将胶放在干胶仪里(将胶放在透明的保护盖的下面，在胶的表面覆盖一层塑料薄膜)。

　　7.打开真空泵。

　　8.按START键开始干胶程序。

　　9.干胶程序完成后，打开透明的保护盖，阀门旋到开的位置，然后关掉真空泵。

　　干胶时间的选择

　　胶的浓度 胶的厚度 80℃所需时间

　　3%至20% 0.375mm　　　　　　　　30min

　　3%至20% 0.5mm 40min

　　3%至10% 0.75mm 40min到60min

　　10%至20% 0.75mm 60min到120min

　　3%至10% 1.5mm 45min到60min

　　10%至20% 1.5mm 60min到120min

　　3%至10% 3mm 60min到120min

　　10%至20% 3mm 120min到180min

　　【Leica荧光显微镜】

　　简要操作步骤

　　1.打开12V/100W Leica的电源开关,至少预热10分钟。

　　2.打开显微镜的电源开关。

　　3.放置样品，调好放大倍数、焦距和视野。

　　4.移动light stop至 。

　　5.滑动filter block至相应光路。

　　6.将光线调节旋钮调到最小。

　　7.镜下观察样品的荧光染色情况。

　　8.如果样品有微红色背景，可以将BG 38 filter移动至 ，以消除背景色的干扰。

　　9.如要拍照，需将相机与显微镜连接，将显微镜上的拉杆拉出，这时在相机上可直接观察样品的荧光染色情况，并拍照保存。

　　10.结束后，关掉显微镜和12V/100W Leica的电源开关。

　　【PCR仪】

　　操作步骤：

　　-RUN ENTER

　　PROGRAM PROGRAM

　　1、开机：打开开关，视窗上显示“SELF TEST”,显示10秒中后，显示RUN-ENTER菜单：准备执行程序。

　　2、放入样本管，关紧盖子。

　　3、如果要运行已经编好的程序，则直接按《Proceed》，用箭头键选择已储存的程序，按《Proceed》，则屏幕显示：

　　-ENABLE DISABLE

　　heated lid

　　按《Proceed》选择ENABLE，则开始执行程序。

　　-NEW LIST

　　EDIT DELET

　　4、如果要输入新的程序，则在RUN-ENTER菜单上用箭头键选择ENTER PROGRAM,按《Proceed》，屏幕显示

　　Step 1 _TEMP

　　GOTO Opiton End

　　按《Proceed》，1)选择NEW,命名新的程序，最多8个字母，输入后按《Proceed》确认(如何输入字母、数字)。

　　2)输入程序步骤：名字输入后，显示

　　按《Proceed》则可以输入温度(0～100℃)，按《Proceed》确认后，则可以输入孵育时间，用《Select》键移动光标，输入数字，完成后按《Proceed》确认，跳到下一步，输入方式同上。

　　3)选择GOTO，输入循环步骤时链接到第几步(循环数最多可达9999次)(为实际循环数-1)。

　　Step extend

　　Increment slope

　　4) 选择option,再选择increment,按《Proceed》确认，输入初始的温度，确认后输入时间，按《Proceed》确认，然后输入每个循环增加或减少的温度，增加用正值，减少用负值(-0.1℃～6℃)，按《Proceed》确认。

　　选择extend, 按《Proceed》确认,输入每个循环增加或减少的时间(-60～60秒)，按《Proceed》确认。

　　选择slop(指温度上升或下降的速率),输入温度的改变值(-0.1～1.5℃)按《Proceed》确认，然后输入加热或致冷的速度，按《Proceed》确认。

　　4)选择End,输入结束步骤。

　　5、输入完成的程序后，到RUN-ENTER菜单，选择新程序，开始运行。

　　6、其它：用《pause》可以暂停一个运行的程序，再按一次继续程序。

　　用《stop》或《Cancel》可停止运行的程序。

　　编辑程序：

　　1、可以用《Cancel》键删除输错的值，输入新的值后按《Proceed》确认。

　　2、对于未输完的程序，要先输入END，按《Proceed》将程序储存后才能删除。

　　3、删除已经储存的程序：从RUN-ENTER菜单中选择RUN-PROGRAM，按《Proceed》，显示主菜单，选择DELET,用《Select》选择删除。

　　4、查看程序的步骤：在主菜单上选择LIST，按《Proceed》，用《Select》将选择名称，再按《Proceed》，显示程序的第一步，用《Select》键向前、向后翻页查看，此时不能改变程序的值。

　　编辑已有的程序：

　　1、从RUN-ENTER菜单中选择RUN-PROGRAM，按《Proceed》，显示主菜单，选择EDIT，按《Proceed》确认，用《Select》键选择要编辑的程序，按《Proceed》显示程序的第一步。

　　2、用《Select》键将光标移到要改变的温度或循环的值上，键入新值，按《Proceed》确认，按《Cancel》删除键入的值，出现空格，键入新值后确认。

　　注：一旦值被改变或删除，原来的值不能恢复，必须重新键入。

　　3、编辑时间值：必须重新键入小时、分钟、秒，按《Proceed》。

　　如何设置一个PCR体系：

　　一般分为8步：

　　1、预变性：可用94～95℃，2～10min,一般用5min。

　　2、变性：一般用94℃，30s~2min,一般45s~1min。

　　3、退火：温度自定，30s~2min。

　　4、延伸：70～75℃，一般72℃，对于〈2kb,<1min;>2kb,每增加1kb加1min。

　　5、循环数：一般25～35个循环。

　　6、最终延伸：72℃，5～15min。

　　7、保存：10℃，时间设为0。

　　8、END。