荧光PCR的分析方法

　　对荧光定量PCR结果的分析方法我们分为两种：绝对定量分析法和相对定量分析法。

　　1、绝对定量分析方法，起始浓度的对数跟循环数的线性关系，标准曲线由已知拷贝数的标准品绘制，根据样品的Ct值，可求样品的模板量。

　　(1)标准品的制备：

　　1V的样品原液(i)+9V稀释缓冲液，得到ii;

　　1V的ii +9V稀释缓冲液，得到iii;

　　1V的iii + 9V稀释缓冲液，得到iv;

　　1V的iv +9V稀释缓冲液，得到v。

　　(2)拷贝数的计算：待测样本浓度(ng/ul)=OD260×40*稀释倍数

　　样品分子量+碱基数×324

　　待测样本拷贝数=待测样本浓度/样本分子量×6×1014

　　从扩增数据得到循环数，通过标准曲线，我们可以求出样品的拷贝数。

　　2.相对定量分析方法：

　　其又可有双标准曲线法和双Ct法。所谓相对，就只是实验前后结果的对比，反映了反应前后的数据的差值。

　　(1)双标准曲线法，分析简单，但是对于每一个基因，每一轮实验都需要做标准曲线，而且必须有特定的标准品作标准曲线，这样的标准品不代表样品扩增的真实状态。这种方法常用于基因表达调控。

　　F=待测样品目的基因浓度/待测样品参照基因浓度÷对照样品目的基因浓度/对照样品参照基因浓度

　　(2)双Ct法，此方法不用对看家基因和目的基因做标准曲线，而只需要对待测样品分别进行PCR扩增即可，标准曲线的差值<0.1.假若扩增效率为100%或标准曲线及每次扩增之间的效率都保持一致，这样实验条件优化较难为复杂。这种分析方法较长用于基因表达调控研究中。