高效液相色谱仪常规分析操作步骤及规程

　　高效液相色谱是目前应用最多的色谱分析方法，高效液相色谱系统由流动相储液体瓶、输液泵、进样器、色谱柱、检测器和记录器组成，其整体组成类似于气相色谱，但是针对其流动相为液体的特点作出很多调整。

　　1).过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。

　　2).对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。

　　3).打开HPLC工作站(包括计算机软件和色谱仪)，连接好流动相管道，连接检测系统。

　　4).进入HPLC控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。

　　5).有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10ml/min。

　　6).调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。点击injure，选用合适的流速，点击on，走基线，观察基线的情况。

　　7).设计走样方法。点击file，选取se-lectusersandmethods，可以选取现有的各种走样方法。若需建立一个新的方法，点击newmethod。选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，根据需要而不同。选完后，点击protocol。一个完整的走样方法需要包括：a.进样前的稳流，一般2-5分钟;b.基线归零;c.进样阀的loading-inject转换;d.走样时间，随不同的样品而不同。

　　8).进样和进样后操作。选定走样方法，点击start。进样，所有的样品均需过滤。方法走完后，点击postrun，可记录数据和做标记等。全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余物。

　　9).关机时，先关计算机，再关液相色谱。

　　10).填写登记本，由负责人签字。

　　注意事项：

　　1).流动相均需色谱纯度，水用20M的去离子水。脱气后的流动相要小心振动尽量不引起气泡。

　　2).柱子是非常脆弱的，第一次做的方法，先不要让液体过柱子。

　　3).所有过柱子的液体均需严格的过滤。

　　4).压力不能太大，最好不要超过2000psi。