免疫组化实验操作

　　免疫组化实验操作

　　60℃烤片2小时

　　脱蜡。二甲苯脱蜡15分钟，三次

　　水化。依次经过无水乙醇、95%、90%、80%、70%，各2分钟，蒸馏水(或自来水)5分钟

　　PBS洗5分钟，三次

　　3%双氧水封闭20分钟，PBS洗5分钟，三次

　　抗原修复。枸橼酸缓冲液(约92-95℃)煮沸(沸水浴)修复15分钟，自然凉至室温。PBS洗5分钟，三次

　　正常山羊血清封闭，37℃15-20分钟

　　一抗孵育，4℃过夜.

　　复温20分钟，PBS洗5分钟，三次

　　二抗孵育，37℃20分钟(二抗为生物素标记的羊抗兔IgG)，PBS洗5分钟，三次

　　三抗孵育，37℃20分钟(三抗为辣根酶标记的链酶亲和素)，PBS洗5分钟，三次

　　DAB显色，镜下观察结果，适时终止

　　苏木素复染5分钟，自来水冲洗片刻，75%的盐酸酒精溶液分化30秒，自来水冲洗5分钟蓝化

　　脱水。依次经过70%、80%、90%、95%、无水乙醇，各2分钟，二甲苯15分钟，三次

　　封片，中性树胶封片