总胆碱的测定方法

　　比色法

　　1.原理

　　食物中的胆碱经过碱处理提取后，通过Florisil柱色谱纯化，然后用雷纳克盐(reineckate)与胆碱反应形成粉红色的胆碱-雷纳克盐复合物，这种复合物被丙酮洗脱后，在526nm有最大吸收，其吸收值与胆碱浓度成正比。

　　2.适用范围

　　参照《Methods of Vitamin Assay》。使用于各类食物中胆碱的测定。最小检出限为0.15mg。

　　3. 仪器与设备

　　(1) 实验室常用设备。

　　(2) 回流提取装置。

　　(3) 色谱柱：为0.8cm(内径)×30cm的玻璃柱，柱上端为容积30～50ml的储液池，底端收缩变细，并装有活塞。活塞上约1 cm处有一玻璃筛板，筛板孔径为16～30μm。

　　(4) 分光光度计。

　　4. 试剂

　　除特殊说明外，所有试剂均为分析级，实验用水为蒸馏水。

　　(1) 甲醇。

　　(2) 氯仿。

　　(3) 乙酸甲酯。

　　(4) 丙酮：用前重蒸馏。

　　(5) 10% 丙酮： 取50ml丙酮溶解于450ml水中。

　　(6) 冰乙酸。

　　(7) 冰乙酸-甲醇溶液：取50ml冰乙酸和400ml甲醇混合。

　　(8) 饱和氢氧化钡提取液：于1000ml甲醇中加入40g无水Ba(OH)2，搅拌10min,再加入100ml氯仿，混合，使Ba(OH)2饱和，过滤去除多余的Ba(OH)2。

　　(9) 硅镁吸附剂(Florisil)：Sigma 公司，60～100目。

　　(10) 雷纳克铵(Ammonium Reineckate)饱和溶液：称取2～3g雷纳克铵，加入100ml水中，搅拌10min ,过滤去除多余的雷纳克铵。实验当日配制。

　　(11) 胆碱标准贮备液(5g/L)：准确称取无水氯化胆碱0.57613g，溶解于水中，并定容至100mL。冰箱保存。

　　(12) 胆碱标准工作液(1g/L)：准确吸取2.0ml标准贮备液，用水稀释定容至100ml。