常用原代细胞培养之分散细胞培养

　　原代细胞培养中最常用的是分散细胞培养之一。分散细胞培养，即将组织块用机械法或化学法使细胞分散。如欲从胎儿或新生儿的组织分离到活性最好的游离细胞，经典的方法是用蛋白水解酶(如胰蛋白酶和胶原酶)消化细胞间的结合物，或用金属离子螯合剂(如EDTA)除去细胞互相粘着所依赖的Ca2+，再经机械轻度振荡，使之成为单细胞。

　　举例：神经细胞分散培养实验-基本技术指南

　　从神经组织解离到建立原代细胞培养通常需要几天，甚至数周。这个过程不仅繁琐， 还很单调。其实还有一种捷径，几个小时就能实现从神经组织到体外培养细胞系的产生。 这个无缝的流程让研究人员充分利用了宝贵的样品，同时还有宝贵的时间。本文就举个例 子，说明一下从组织样品到细胞培养的每一步。

　　步骤1：神经组织解离

　　神经组织的解离是第1步。Neural Tissue Dissociation Kit能够将胚胎、新 生或成体来源的组织温和解离成单细胞悬液。两步的酶解过程只需要不到一个小时，就能 产生大量下游分析即用的活细胞。解离过程可以手工完成，也可自动完成。

　　解离过 程如下：

　　将脑组织切成小块，收集在HBSS中，300×g离心2分钟 → 加入预热的酶混 合物1，37°C孵育 → 再加入酶混合物2 → 解离(手工解离或自动解离)→ 加到30 μm 细胞滤器中，用HBSS洗涤两次

　　步骤2：髓磷脂碎片的去除+神经细胞的分离

　　获得了单细胞 悬液之后，下一步就是目的细胞的分离。在细胞分离方面，MACS技术无疑是金标准，目 前发表的文献已达12000多篇。别急，在细胞分离之前还有一个小插曲。那就是去除对后 续免疫标记有干扰的髓磷脂(myelin)。美天旎最近推出的Myelin Removal Beads能够从 神经细胞悬液中去除髓磷脂，标记+分离的全过程只需要35分钟。

　　髓磷脂的去除是了为回收率。做过比对实验，将步骤1得到的细胞悬液分成两组，一组用Myelin Removal Beads处理，一组不处理。然后分别从两组中分离神经前体细胞。第一组 (处理过)的回收率达95%，第二组(未处理)只有80%。

　　步骤3：神经细胞培养 分离到了你想要的神经细胞， 下一步就是原代细胞培养了。