工具酶的主要用途

　　在酶学分析中，作为试剂用于测定化合物浓度或酶活性浓度的酶称为工具酶。工具酶在酶学分析中具有重要作用。酶偶联反应体系中的指示酶和辅助酶即为工具酶。常用的工具酶有氧化还原酶类、转移酶类和水解酶类，但以氧化还原酶类更多见，因为其产物最易被直接监测而成为指示酶。

　　在临床生物化学检验中，许多项目的测定往往使用有工具酶的参与的类似的反应原理，即所谓共通(或通用)反应途径。在分光光度法中，最常用的两类通用反应途径如下：

　　1.NAD(P)+或NAD(P)H偶联的脱氢酶及其指示反应许多氧化还原反应，尤其是有作为工具酶的脱氢酶(如LD、GLD、G6PD等)参与时，常将底物去除的氢原子传递给NAD(P)+而形成NAD(P)H。NAD(P)H不仅在340nm有特征性光吸收，可用分光光度法进行检测，而且用 365nm波长的紫外光激发，可使其在460nm发射强烈荧光并进行测定。目前应用的测定项目有：葡萄糖、尿素、b-羟丁酸、甘油三酯、甲醇、血氨、 ALT、AST、LD、GLD、CK、ALD、G6PD和ICD等。

　　2.偶联H2O2的工具酶及其指示反应临床化学测定中，葡萄糖、尿酸、胆固醇、甘油、丙酮酸的测定，可分别利用相应的工具酶将其氧化产生H2O2;H2O2再通过以氢(或电子)为受体的指示酶和以NAD(P)H为辅酶参与的两类指示反应进行检测。前者主要有两类工具酶参与反应：过氧化氢酶或称触酶(catalase)及过氧化物酶(peroxidase，POD)，两者均为含三价铁的指示酶。以指示酶POD最为常用。H2O2在POD的直接催化下，氧化芳香族胺色素原生成有色的色素，如POD催化H2O2与4-氨基安替比林(4-AAP)和酚反应生成醌亚胺(红色)，最大吸收峰在500nm。这一反应由Trinder在1969年提出，故称为Trinder反应。