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简单操作这五个步骤巧去牛血清脂肪酸
[2015/3/12]
一、溶解:取适量的牛血洁白蛋白提取物,溶解于10倍的蒸馏水中,溶解温度在23~27℃。用浓度为0.2N的HCl,调治PH至3~3.5。
二、分析:充实溶解后的溶液牛血洁白蛋白移至冰水殽杂物中举行冰水浴,同时连续搅拌,维持30min。
① PH为3~3.5 ② 活性炭用量为5~6%
三、吸附:参加5%的活性炭,混匀,混悬液将混悬液移至冰水殽杂物中举行冰水浴,同时连续搅拌,维持1小时。过滤,滤渣采取后再利用。冰水殽杂物的温度为0~4℃
四、浓缩:滤液用0.2N的NaOH调治PH值至7.0,然后用20000分子量以下的超滤器举行超滤浓缩。
五、冻干:将浓缩液按冻干曲线冻干,即将超滤后的浓缩液敏捷冷冻至-40℃,连续1小时左右,升到-25℃,连续10~20小时,再迟钝升温至0℃,维持1~4小时,升温至生存温度20℃,分装为成品。
牛血清在细胞培养实验中的分析
1.细胞生长速度迟钝,长满单层时间长;从同一细胞瓶中分出两瓶细胞,用同一种作育液,分别参加10%的比较血清和待检血清,在雷同条件下作育72小时,会出现比较血清长满单层,而待检血清约莫只有60~70%,这种血清就不得当用来大范围作育细胞。
2.细胞传代后形态不正常,细胞状态产生变革;由于血清的质量问题,使本来状态正常的细胞经传代后形态会变差;好比:细胞瓶里会出现一些蠕动的小黑点(并非污染),大概细胞外貌形成一层油状包围物;细胞的表面变得暗昧,细胞之间的间隙被血清中的蛋白颗粒添补,从而影响细胞向四周扩展生长。
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