无菌接种操作步奏

无菌操作环节

（1）接种室应保持清洁，用煤粉酚皂液擦洗台面及墙壁，定期用乳酸或甲醛熏蒸。每次使用前，均应用紫外灯灭菌。定期对接种室作无菌程度的检查。

（2）进入接种室前，应先做好个人卫生工作，在缓冲间内要更换工作鞋帽、工作衣、戴口罩。工作衣、工作鞋、口罩只准在接种室内使用。不准穿到其它地方去，并要定期更换、消毒。

（3）接种的试管、三角并瓶等应做好标记，注明培养基、菌种的名称、日期。移入接种室内的所有物品，均须在缓冲室用70%酒精擦试干净。

（4）接种前，双手用70%酒精或新洁尔消毒，操作过程不离开酒精灯火焰；棉塞不乱放；接种工具使用前后均需火焰灭菌。

（5）培养箱应经常清洁消毒。

接种室的消毒方法

1、紫外线灭菌接种室使用前打开紫外灯照射约30分钟，就能使空气和室壁表面基本上无菌。为了加强灭菌效果，在开灯以前可以在接种内喷洒石炭酸溶液，使空气中附有微生物的尘埃降落，并杀死一些微生物。接种室的台面等，可以用2-3%的来苏尔擦洗。紫外线对人体皮肤，尤其对眼睛具有杀伤力，因皮不要直视开着的紫外灯，也不能在开着灯的情况下工作。

2、喷洒石炭酸将石炭酸水浴，稍热，使之溶解。用吸耳球通过吸管吸取该溶液，配成5%溶液。对于小房间，可用喷雾器由上至下、由里至外顺序进行喷雾，并门，稍等片刻即可使用。石炭酸对皮肤有较强的毒害作用，使用时不要接触皮肤。

3、福尔马林熏蒸

（1）用量：市售福尔马林是37-40%的甲醛水溶液。常用量按每立方空间2-6ml计算。

（2）熏蒸方法：用福尔马林熏蒸有两种方法：

①加热熏蒸：按熏蒸空间计算,量取甲醛溶液,放在酒精灯上方的小铁筒或烧杯中,点燃酒精灯,关闭室门。酒精灯最好在甲醛蒸完后即自行熄灭。

②氧化熏蒸：在一瓷杯里铺一张报纸，放入高猛酸钾（其用量为1/2甲醛量），再取定量的甲醛溶液，倒在盛有高猛酸钾的容器里，立即关门。几秒钟后，由高猛酸钾氧化甲醛反应所产生的热将其余的甲醛蒸为气体。由于甲醛对人眼、鼻有强烈的刺激作用，熏蒸后相当时间内不能进入室内工作。因此，接种室至少在使用前24小时进行熏蒸，房间应密闭，保持12小时。之后可取与甲醛等更是的氨水，倒在一个瓷碗里，放入熏蒸过的接种室，以减少甲醛对人的刺激作用。用氨水中和，至少应在工作前2小时进行。

4、过滤除菌近几年来，多采用一种称之为超净工作台的接种室，其原理是借助于一鼓风机将普通空气鼓入，通过粗滤、超滤纤维过滤后，进入工作台内的空气即为无菌空气。整个工作室内要求清洁无尘，这样可延长超净工作台的使用寿命。新的超净工作台使用前，要进行无菌试验，确定合格方可使用，接种前，应先将工作台开启5-6分钟。 接种室无菌程度检查取无菌的营养琼脂平板，在接种室内台上和台下各放一套，把皿盖打开15min，然后盖好，倒置37℃恒温培养24-28小时，如果每个皿内菌落不超过4个，则可以认为无菌程度良好，若菌落很多，则应对接种室进一步灭菌。