PCR实验室整体建设解决方案

[2020/4/28]

PCR实验室整体建设解决方案

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PCR实验室是什么?

PCR实验室又称基因扩增实验室,PCR是聚合酶链式反应(PolymeraseChainReaction)的简称,是一种分子生物学技术,用于放大特定的DNA片段,可看作生物体外的特殊DNA复制。通过DNA基因追踪系统,能迅速掌握患者体内的病毒含量,其精确度高达纳米级别。

 

PCR实验室检测工作流程?

检测工作流程(传统PCR):PCR检验试剂的准备—样品的制备—核酸(或)蛋白等目标物质的提取—PCR扩增实验—产物分析(电泳、凝胶成像等)或者荧光定量—结果判定—结果表达,出具检验报告。若采用荧光定量PCR,则扩增和产物分析在同一个步骤中进行。根据检验工作流程,传统PCR可分为四个主功能间,分别为试剂准备区、样品制备区、扩增区、产物分析区,各房间前设计缓冲间,且增设一条PCR走廊。主功能间之间通过传递窗传递。压力流向:空气流向可按照试剂准备区→标本制备区→扩增区→产物分析区进行,防止扩增产物顺空气气流进入扩增前的区域,造成气溶胶污染。可按照从试剂准备区→标本制备区→扩增区→产物分析区方向空气压力递减的方式进行。可通过安装排风扇、负压排风装置或其他可行的方式实现。注:气溶胶(aerosol)由固体或液体小质点分散并悬浮在气体介质中形成的胶体分散体系,容易随着气流扩散,造成交叉污染,导致实验数据假阳性。

 

试剂准备间设置要求

各功能间的设置及要求:1、试剂准备间a)主要功能:贮存试剂的制备、试剂的分装和扩增反应混合液的准备。b)工作区域压力要求(规范或文件要求):食品行业、出入境行业(针对转基因产品):缓冲区负压,工作区正压;临床检验行业:要求压力流向试剂准备区→标本制备区→扩增区→产物分析区方向空气压力递减的方式进行。设置正压。HIV核酸检测:要求与临床检验一样,但建议保持微正压。疾病控制中心:宜微正压。c)布置要求:试剂低温冰箱、边台带水、传递窗、超净工作台、移液器、纯水机、消毒车、PH计等。

 

样品制备区设置要求

2、样品制备区a)主要功能:实验室样品的混样和测试样品的制备、核酸的提取。b)工作区域压力要求(规范或文件要求):食品行业、出入境行业(针对转基因产品):缓冲区负压,工作区正压(比试剂准备间低压);临床检验行业:要求压力流向试剂准备区→标本制备区→扩增区→产物分析区方向空气压力递减的方式进行;设置正压。HIV核酸检测:要求与临床检验一样。疾病控制中心:宜为BSL-2或以上等级实验室。c)布置要求:-20℃、80℃样本低温冰箱、边台带水、传递窗、生物安全柜、核酸提取仪、高速台式冷冻离心机、水浴锅或者金属浴、移液器、混匀仪、磁力搅拌器等。d)由于B2生物安全柜排风,需要对房间进行补风,补风需要和生物安全柜做联锁。

 

扩增区设置要求

3、扩增区a)主要功能:PCR扩增反应体系的配制和模板的加入,核酸扩增。b)工作区域压力要求(规范或文件要求):食品行业、出入境行业(针对转基因产品):缓冲区负压,工作区正压或减压(比样品制备区低)临床检验行业:要求压力流向试剂准备区→标本制备区→扩增区→产物分析区方向空气压力递减的方式进行;HIV核酸检测:要求与临床检验一样,但建议保持微负压。疾病控制中心:压力不高于样品制备区。c)布置要求:基因扩增仪、荧光定量PCR仪、移液器等。

 

产物分析区设置要求

4、产物分析区(做荧光定量可以不用这个区)a)主要功能:扩增产物的分析,污染最重的房间,气溶胶最容易扩散的房间。b)工作区域压力要求(规范或文件要求):食品行业、出入境行业(针对转基因产品):缓冲区负压,工作区负压或减压(主功能区间压力最低,但比缓冲高,气流往缓冲间走)临床检验行业:要求压力流向试剂准备区→标本制备区→扩增区→产物分析区方向空气压力递减的方式进行;HIV核酸检测:要求与临床检验一样,但建议保持微负压。疾病控制中心:压力低于扩增区。c)布置要求:冰箱、边台带水、传递窗、电泳仪、凝胶成像系统、电脑等。

 

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