如何在现代分子生物学实验室中应用超微量分光度计

如何在现代分子生物学实验室中应用超微量分光光度计

核酸的定量是超微量分光光度计最常用的功能。寡脱氧核苷酸、单链DNA、双链DNA和RNA可溶于缓冲液中，

可定量溶解.核酸最高吸收峰的吸收波长为260nm。各核酸的分子组成不同，其转化率也不同。为了量化不同类型的核酸，

应事先选择相应的系数。例如，1OD的吸光度值分别与单链DNA、40μg/ml的50μg/ml、37μg/ml和30μg/ml的50μg/ml的吸光度值相当。

测试后，用上述系数换算吸光度值，得到相应的样品浓度。在试验前，选择正确的程序，输入原液和稀释剂的体积，

然后测试空白液体和样品液体。然而，实验并非一帆风顺。阅读不稳定可能是实验者最头疼的问题。仪器灵敏度越高，吸收值漂移越大。

事实上，超微量分光光度计的设计原理和工作原理允许吸光度值在一定范围内变化，也就是说，仪器具有一定的准确度和准确度。

此外，还需要考虑核酸的物理化学性质和溶解核酸缓冲液的pH值、离子浓度等因素：在实验中，离子浓度过高，也会导致读数漂移。

因此，在一定的pH值和较低的离子浓度(如TE)的缓冲液中，可以很好地稳定读数。样品的稀释浓度也是一个不容忽视的因素：

因为样品中不可避免地含有一些细小的颗粒，特别是核酸样品。这些小颗粒的存在会干扰测试效果。

为了尽量减少粒子对测试结果的影响，要求核酸的吸光度值至少为0。1A，吸光度值优于0。1≤1.5A.在此范围内，粒子的干扰相对较小，结果稳定。

这意味着样品的浓度不应太低或过高(超过光度计的测试范围)。最后，操作因素，如充分混合，否则吸收值太低，

甚至是负值；混合物不能有气泡，空白液体中不存在悬浮物，否则读数漂移强烈；

必须使用相同的比色杯来测试空白液体和样品，否则浓度差太大；转换系数与样品浓缩单元选择相同；

不能使用窗口磨损的比色杯；样品的体积必须满足比色杯所要求的最小体积等。

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