如何改善和提高正相色谱的重现性

　　在正相色谱分离模式中，水是一种溶剂强度非常高的溶剂，即便流动相中有少量的存在就能对保留时间产生强烈的影响，特别是在硅胶或氧化铝为固定相而使用的流动相非极性或疏水性很强的情况下尤其是这样。因为烷烃类溶剂天然含水量极低，基于无水烷烃的流动相，需要很长时间才能和环境中水分达成平衡。所以，正相色谱柱使用几天后就观察到保留时间有漂移的现象是司空见惯的。可能正是存在这个令人头疼的问题，成为了当今正相色谱没有反相色谱那么普及常用的主要原因。

　　使用溶剂强度ε0大于0.35的流动相，保留时间漂移的问题不大，如用的是极性基团键合的正相固定相，流动相的ε0值还可以更小些。此外，还有一个非常有效的改善正相色谱保留时间重现性的方法：使用和水“半饱和”的正相流动相。

　　“半饱和”流动相配置方法：将无水的非极性流动相分成两半;其中一半中加入一定量水，并混匀搅拌约一小时，静止分层后，将多余的水相全部除去;将无水的一半流动相和已与水饱和过的另一半流动相两部分重新混合在一起，就配成了“半饱和”流动相。

　　使用“半饱和”流动相，使色谱柱平衡时间大大加快，色谱柱的含水量相对不会受环境中水份含量的很大影响，可以极大改善色谱保留时间的重现性;另外流动相中的一定量水分，首先和固定相表面的活性最大位点作用，结果使表面不均一性减少，非特异性吸附影响减弱，可获得更对称的峰形。