生物实验中试剂的作用及实验方法总结

　　一、化学物质的检测方法

　　①淀粉——碘液 (蓝色)

　　②还原性糖——斐林试剂\班氏试剂(砖红色)

　　③CO2——Ca(OH)2溶液(澄清石灰水变浑浊)

　　④乳酸——pH试纸

　　⑤O2——余烬复然

　　⑥蛋白质——被蛋白酶水解 、双缩脲试剂(紫红色)

　　⑦脂肪——苏丹Ⅲ染液 (橘黄色)、苏丹Ⅳ染液 (红色)

　　⑧DNA——二苯胺(蓝色)

　　⑨染色体——龙胆紫溶液，醋酸洋红溶液

　　二、实验条件的控制方法

　　1、加水中氧气——泵入空气或吹气或放入绿色植物

　　2、减少水中氧气——容器密封或油膜覆盖或用凉开水

　　3、除去容器中CO2——NaOH溶液

　　4、除去叶中原有淀粉——置于黑暗环境

　　5、除去叶中叶绿素——酒精水浴加热

　　6、除去光合对呼吸干扰——给植株遮光

　　7、如何得到单色光——棱镜色散或透明薄膜滤光

　　8、血液抗疑——加入柠檬酸钠

　　9、线粒体提取——细胞匀浆离心

　　10、骨无机盐的除去——盐酸溶液

　　11、灭菌方法——培养基用高压蒸汽灭菌;接种环用火焰灼烧灭菌;双手用肥皂冼净，擦干后用75%酒精消毒;实验室或接种箱用甲醛蒸汽或紫外灯灭菌;整个过程都在实验室无菌区或酒精灯旁进行。

　　三、实验结果的显示方法

　　①光合速度——O2释放量或CO2吸收量或有机物生成量

　　◆水生植物可依气泡的产生量或产生速率;

　　◆离体叶片若事先沉入水底可依单位时间内上浮的叶片数目;

　　◆植物体上的叶片可依指示剂(如碘液)处理后叶片颜色深浅。

　　②呼吸速度——O2吸收量或CO2释放量或有机物消耗量

　　③原子或分子转移途径——放射性同位素示踪

　　④细胞液浓度大小——质壁分离

　　⑤植物细胞是否死亡——质壁分离

　　⑥甲状腺激素—动物耗氧量，发育速度等

　　⑦生长激素—生长速度(体重、体长变化)

　　⑧胰岛素作用—动物活动状态

　　⑨菌量—菌落数，亚甲基蓝褪色程度

　　四、实验中控制温度的方法

　　1、还原糖，DNA鉴定——沸水浴加热

　　2、酶促反应——水浴保温

　　3、用酒精溶解叶中的叶绿素——酒精要隔水加热、

　　4、细胞和组织培养以及微生物培养——恒温箱培养

　　五、实验中常用器材和药品的使用

　　1、NaOH：用于吸收CO2或改变溶液的pH

　　2、Ca(OH)2：鉴定CO2

　　3、CaCl2提高细菌细胞壁的通透性

　　4、HCl：解离或改变溶液的pH

　　5、NaHCO3：提供CO2

　　6、NaCl：配制生理盐水或用于提取DNA

　　7、琼脂：激素或其他物质的载体或培养基的凝固剂

　　8、亚甲基蓝：用于检测污水的细菌含量

　　9、酒精：用于消毒、提纯DNA、叶片脱色及配制解离液

　　10、蔗糖：测定植物细胞液浓度或观察质壁分离和复原、作为碳源和能源物质

　　11、滤纸：过滤或纸层析

　　12、纱布、尼龙布：过滤，遮光

　　13、龙胆紫溶液或醋酸洋红：碱性染料，用于染色体染色

　　14、柠檬酸钠——血液抗凝剂

　　六、一些常见的实验方法

　　⑴、根据颜色来确定某种物质的存在：

　　淀粉 I2(蓝色);还原性糖 斐林试剂(砖红色);脂肪 苏丹Ⅲ(橘黄)或 苏丹Ⅳ(红色);蛋白质 双缩脲试剂(紫色);

　　大肠杆菌 伊红和美蓝(菌落为深紫色，有金属光泽)

　　⑵、用颜色标记法来确定原肠胚三个胚层的分化情况。

　　⑶、用荧光标记法来证明细胞膜具有一定的流动性

　　⑷、同位素示踪法：光合作用产生氧气的来源; 光合作用中二氧化碳的去向; 噬菌体侵染细菌实验证明DNA是遗传物质，蛋白质不是遗传物质; DNA的复制是半保留复制。

　　⑸、确定某种元素为植物生长必需的元素的方法: 水培法(完全培养液与缺素完全培养液对照)

　　⑹、获得无籽果实的方法: 用适宜浓度的生长素处理花蕾期已去雄的子房，如无籽蕃茄、 诱导染色体变异，如无籽西瓜。

　　⑺、确定某种激素功能的方法： 饲喂法，切除注射法，阉割移植法，切除口服法。

　　⑻、确定传入、传出神经的功能： 刺激 观察效应器的反应或测定神经上的电位变化。

　　⑼、植物杂交的方法 雌雄同花：花蕾期去雄 套袋 开花期人工授粉 套袋 雌雄异花：花蕾期雌花套袋 开花期人工授粉 套袋

　　⑽、确定某一显性个体基因型的方法： 测交; 该显性个体自交。

　　⑾、确定某一性状为显性性状或隐性性状的方法： 具有一对相对性状的纯合体的杂交 自交，观察后代是否有性状分离。

　　⑿、确定某一个体是否具有抗性基因的方法： 确定小麦是否具有抗锈病基因，用锈病菌去侵染，一段时间后，观察有无锈斑出现。

　　⒀、鉴定血型的方法： 用标准血清与待测血型混合，在显微镜下观察血液的凝集情况。

　　⒁、育种的方法： 杂交育种;人工诱变育种;单倍体育种;基因工程育种;细胞工程育种;多倍体育种等。

　　⒂、测定种群密度的方法：样方法; 标志重捕法

　　⒃、生态瓶的制作方法;瓶必须透明，且封闭

　　⒄、分离微生物的方法： 平板划线法;用选择培养基培养(如：圆褐固氮菌的分离，金黄色葡萄球菌的分离，细菌和酵母菌的分离)

　　⒅、测定微生物群体生长的方法：

　　测定细菌的数目---显微计数

　　测定细菌的重量---取一定体积的培养基，经离心分离，反复洗涤后，称湿重，或烘干后称干重。

　　七、实验研究方法

　　1、显微观察法 如观察植物细胞有丝分裂的实验，观察植物细胞质壁分离和复原的实验。

　　2、观察法 观察微生物的外在性状和表现等，如观察注射了甲状腺激素的小狗的活动状况，观察动物的毛色和植物花色的遗传实验等。

　　3、同位素示踪法 如噬菌体侵染细菌的实验，用18O和14C追踪光合作用中氧原子和碳原子转移途径的实验等。

　　4、加法创意 如用饲喂法研究甲状腺激素的实验、用注射法研究生长激素的实验，用移植法研究性激素的实验等。

　　5、减法创意 如用阉割法、摘除法研究性激素、甲状腺激素、生长激素的实验，雌蕊授粉后除去发育着的种子实验等。

　　6、杂交实验法 如孟德尔发现遗传定律的植物杂交、测交的实验，小麦的杂交实验等。

　　7、化学分析法 如番茄和水稻对Ca 和Si选择吸收的实验，叶绿体中色素的提取和分离实验等。

　　8、理论分析法 如大小草履虫竞争的实验，植物根向地生长、茎背地生长的实验，植物向光性的实验等。

　　9、模拟实验法 如渗透作用的实验装置，分离定律的模拟实验等。

　　八、实验技术

　　1、光学显微镜的使用

　　适用于观察生物的微观结构，如细胞的结构，包括光镜下可看到的各种细胞器。

　　2、临时装片、切片和涂片的制作技术

　　适用于显微观察，凡需在显微镜下观察的生物材料，必须先制成临时装片、切片或涂片。如“观察植物细胞的质壁分离和复原的实验”中要制作洋葱表皮的临时装片，在生物组织中脂肪的鉴定中要制作花生种子的切片等。

　　3、研磨和过滤技术

　　适用于从生物组织中提取物质，如酶、色素等。研磨时要先将生物材料切碎，然后加入研磨剂〈常用SiO2〉、提取液及其他必要物质，充分研磨后，往往要进行过滤，以除去滤渣，所用过滤器具则根据需要或或根据试题中提供的器材加以选用，如可用滤纸、纱布、脱脂棉、尼龙布等。

　　4、解离技术

　　用于破坏细胞壁，分散植物细胞，制作临时装片。

　　5、恒温技术

　　适用于有酶参加的生化反应，一般用水浴或恒温箱。根据题目要求选用。

　　6、纸层析技术

　　适用于溶液中物质分离。重要步骤包括制备滤纸条、画滤液细线、层析分离。

　　7、根尖培养技术 观察植物根尖有丝分裂的实验

　　8、溶液培养法 探究植物必需的矿质元素的实验，〈拓展——微生物生长因子的判断的实验〉;植物的无土栽培〈注意溶液浓度和溶解氧〉。