分光光度计的性能检查

　　(1)波长校正：使用光电比色计或分光光度计，在更换光源灯、重新安装、搬运或检验后，以及仪器工作不正常时，都要进行波长校正。就是正常工作的仪器，每隔一个月也要检查一次波长，必要时进行校正，这样才能保证波长读数与通过样品的波长符合，保证仪器的最大灵敏度。方法常用谱钕滤光片校正法，适用于721型仪可见光区的波长校正，常以585nm或529nm处的吸收峰或T%为标准。鉴于721型仪器的出射光波长较宽，不易将573nm和585nm的两峰或两谷分开，校正时易产生误差，故推荐用529nm处的峰或谷为标准来进行波长校正。校正时，将仪器按要求预热。要求电源电压稳定。波长度盘置580nm处，T%调至最大，在比色杯处放一白纸条，观察是否有光强均匀、边沿无光晕或杂光的光斑，如不符合要求，可调节灯泡位置使其符合要求，是为波长校正的粗调。再把灵敏度扭置于“1”(最低档)，波长度盘对准529nm，电表机械零点为零，在光路空缺时调T%为100%T，并反复查零点和100%T稳定情况。将谱钕滤光片插进光路，慢慢旋转波长度盘，找到透光率最低的一点(向左右微旋波长度盘时，该点透光率值均增加)，这一点即为波长529nm。检查波长度盘的指示值是不是529nm，如指示值为534nm，此时波长工误差为5nm，超出规定(±1nm)必须进行调整。

　　调整方法：将波长度盘对准529nm，从光路取出谱钕滤光片，光路空缺时调电表指针到100%T，再将谱钕滤光片插进光路。打开仪器左侧小盖板，找到波长校正螺丝(3个中左侧柄长的一个);反时针方向微微调节(负误差时顺时针方向)，使电表指针的指示T%为最低。反复检查波长误差情况，直到符合仪器技术指标为止。盖好左侧小盖板，校正结束。

　　有些高档仪器如岛津UV-260型双光束分光光度计，可使用氢灯或置谱钕滤光片于测定比色槽内，编进滤工扫描程序后，仪器即可自动地在一定波长范围内进行波长校正。高档分光光度仪的光学系统密封在一个单元组件内，若发生故障，波长不准，常须请制造商派专人修理。其它尚有谱线校正法、干涉滤光片校正法和有色溶液校正法等，可参考有关资料。

　　(2)线性检查：线性检查包括仪器线性及测定方法线性两个方面的检查。线性误差表现为溶液的浓度与吸光度不成线性关系，出现正偏离或负偏离的现象。这种偏离，按比耳定律的现象来自两个方面：一是溶液本身不符合比耳定律，这种现象叫做化学偏离;二是仪器本身各种因素的影响，使吸光度测定值与浓度之间不成线性关系，这种现象叫仪器偏离。此处研究的是后者。仪器偏离的因素很多，如杂光、有限带宽、检测器噪声、环境条件变化、波长的变动、比色杯的误差、辐射光的非平行性、检测器本身的非线性等。

　　仪器线性检查常用一种在一定波长及一定浓度范围内确知其服从比耳定律的有色物质，配成不同浓度的溶液，来检查仪器本身是否能如实地反映有色物质的浓度变化。这种检查方法与任何被测物质呈色反应等方法学上的题目无关。用测得的吸光度对浓度作图，在理想情况下应是一条直线。常用的方法是用0.8、1.6、2.4、4.0mg/L伊文蓝浓度系列来检查，波长用610nm。

　　(3)杂光(散光)检查：在吸光度测定中，凡检测器感受到的不需要的辐射都称为杂光。杂光对吸光度测定法的正确性有严重的影响，但却往往被忽视。杂光的来源有：①仪器本身的原因，如单色器的设计、光源的光谱分布、光学原件的老化程度、波带宽度以及仪器内部的反射及散射等;②室内光线过强而漏进仪器，仪器暗室盖不严;③样品本身的原因，如样品有无荧光、样品的散射能力强弱等。

　　杂光检测方法：①紫外光区的杂光监测可用10±0.1g/L的碘化纳溶液，在240nm处测定的吸光度应大于2.00。此外，也可用12g/L的氯化钾溶液，在220nm处测其透光度，即为杂光量，一般应小于1%T。以上测定均用石英杯，以蒸馏水校零。②在可见光区可使用谱钕滤光片或硫酸镍法检查。先用谱钕滤片校正波长，然后用黑纸片挡住比色杯光路(进口仪器带有比色杯样玄色标柱)之后调整0%T，再用空气做空缺调100%T。插进谱钕滤光片，在585nm处测定，其测定值即为杂光水平。

　　(4)比色杯的质量检查：比色杯一般由玻璃、石英或荧石制成，光径1.0或0.5cm,光线通过期有一部分光为空气与玻璃接触面的反射而损失(4%)，另一部分(很少)为玻璃吸收。比色杯的质量除其原料外，再就是玻璃的厚度均匀，上下一致，各杯彼此相配。厂家多以四个一套供给，且杯口上部外面标有箭头，箭头对光源侧使用。尽管如此，在使用前还是应作质量检查。常用伊文蓝法：将一定量的2.0mg/L的伊文蓝溶液注进比色杯中，比色杯内液面应相等。用一个比色杯作标准，用红色滤光片(波长600～610nm)，用水校零后将此杯的读数正确调至50%T，接着读取其余杯的透光度。透光度相差在±0.5%T范围内者为合格。

　　(5)稳定性检查：检查方法：将分光光度计及附件接于0.5kVA以上的可调变压器，先调电压为220V，波长固定在650nm，在光路比色杯装以空缺液，调读数为90%T处，再将电压升至230V及降至190V，观察透光度的漂移值。若介于88.5%～91.5%T之间为合格。在电源电压不变的条件下，在3分钟内其读数漂移不应超过标尺上限值的±0.5%。

　　(6)重复性检查：在波长、工作状态、电源电压、比色杯配套等合格的条件下，进行重复检查。在用交流电源供电时，仪器对一种溶液重复测定的读数值差应小于或即是标尺上限值的1%。试验方法：将分析纯重络酸钾于120～150摄氏度烘干2小时，干燥器中冷却。精称509.1mg于1000ml容量瓶中，以蒸馏水溶解并加至刻度，混匀(此液180mg/L铬)。就用液为30、60、180mg铬/L。取波长440nm，将应用液各浓度管连续测3～5次，各浓度管中最大误差小于1%T为合格。

　　(7)灵敏度检查：将重铬酸钾液配制成30和32.5mg铬/L及120和122.5mg/L铬的4种应用液(浓度差两组各为2.5mg/L铬)。波长440nm，以水校零点，将上述应用液连续测3次吸光度，两组2.5mg/L铬浓度差的吸光度值差都不小于0.01为合格。