蛋白质纯化离子交换法

　　各种蛋白质分子上可能带有?同的电性，经过离子交换管柱，可依其分子带电性的差异而分离开? (Pharmacia 操作手册, Ion Exchange)。

　　仪器设备：

　　塑料管柱 (Bio-Rad Econo-Pac column 732-1010, 1.5×12 cm)

　　分划收集器 (fraction collector, 另需准备干净试管约60 支)

　　浓缩用离心机 (低速5,000 rpm) 及浓缩离心管Centriplus

　　药品试剂：

　　DEAE Sephacel (胶体体积约15 mL，预先以缓冲液Buffer A-0 平衡好)

　　Buffer A-0 (如上述配法)

　　Buffer A-300 溶离液：Buffer A-0 加有0.3 M NaCl

　　Buffer A-500 溶离液：Buffer A-0 加有0.5 M NaCl

　　方法步骤：

　　1) 将Econo-Pac 管柱架好，并将三向阀及软管等组合完成。

　　2) 震荡DEAE Sephacel 胶体使的悬浮，小心倒入管柱中，让胶体慢慢??，在??过程中随时加入buffer A-0，勿使胶体干掉。

　　3) 待胶体??完全后，高?应在15 cm 左右。胶柱以buffer A-0 一直?洗，?速快慢可以?考虑;连接好收集器，每试管收2.5 mL。离子交换法的胶体平衡极为重要，可测?出液的pH 或离子浓?，看是否与buffer A-0 相同，??一样则需要再?洗的。

　　4) 样本的添加方法同上述胶体过滤法，并启动分划收集器开始收集，当样本全部没入胶体后，再加入同体积buffer A-0。以buffer A-0 ?洗50 mL 后，去除胶体上方的缓冲液，但勿使胶体干掉。

　　5) 然后依序以buffer A-300, buffer A-500 溶离的，每批次?洗各50 mL，注意?换浓?时，胶体上方勿残存上一种溶液。

　　6) 收集所有分划，进?蛋白质定?分析以及GUS 活性测定，结果作图。

　　7) 收集GUS 活性区，并以Centriprep-30 浓缩至 _______ mL (IEX)，记得要保?100 μL。

　　8) 离子交换胶体以buffer A-0 洗过50 mL 后，收起?交回。